02 适用范围

本产品不仅适用于Western Blot,也适用于ELISA､ICC及IHC的封闭。

03 产品作用原理

本品可充分激活膜上抗原(Ag),使其暴露出更多的抗体识别位点;同时还能激活抗体(Ab),稳定其抗原结合位点的空间构象,从而提升抗原-抗体的结合速率。

此外,由于本品不含可能导致抗原-抗体发生非特异性桥连聚合的大分子蛋白成分,能够有效去除抗原和抗体表面的潜在非特异结合位点,减少非特异性吸附。

04 使用方法

封闭,孵育,漂洗,所有操作过程需保证:先倒溶液至孵育盒中,再把膜浸入溶液;避免多张膜在一个孵育盒中,确保膜的正面朝上。

1. 抗原位点激活：向干净的孵育盒中加入5-10mL X-Ag&Ab SpeciBind（以让膜漂浮为准），浸入转印后的PVDF/NC膜，膜正面朝上，室温摇床80rpm激活1min。（当蛋白表达含量较低时，建议弃去溶液，重新加入X-Ag&Ab SpeciBind进行二次激活1min）
2. 一抗活化与孵育(方案二选一)
   • 方案一：直接向孵育盒 A 中加入一抗原液，使其终浓度达到抗体说明书的推荐比例。（若孵育盒A中液体总体积为 10 mL，抗体推荐稀释比例为 1:1000，可直接加入 10 μL 抗体原液。）
   • 方案二： 根据抗体说明书推荐比例，先用 X-Ag&Ab SpeciBind 预先稀释制备一抗工作液，倒入干净的孵育盒 B 中（以让膜漂浮为准），将激活后的膜转移至孵育盒B中(膜正面朝上)。 室温摇床50rpm孵育 1~2 h，(也可以 4°C 摇床过夜孵育) 孵育结束后，一抗工作液可回收，4°C 可保存 3 个月，-20°C 可保存半年以上。
3. 漂洗：用高效漂洗液（50x浓缩液用前稀释）5-10mL，摇床80rpm漂洗5min×3次。体积以让膜漂浮为准，保持膜的正面朝上。
4. 二抗活化与孵育：先用X-Ag&Ab SpeciBind预先稀释二抗，再将稀释后的溶液倒入干净的孵育盒C中。（以让膜漂浮为准），直接将漂洗后的膜移至孵育盒C中（膜正面朝上）。室温摇床80rpm孵育1h。（建议加倍稀释二抗，若二抗说明书推荐稀释比例为1:10000，按照1:20000稀释）
5. 重复漂洗：重复步骤3，漂洗三次。
6. ECL显影：将膜浸入混合好A/B的ECL溶液中，转移至曝光保护膜中，然后在曝光台上进行曝光。（避免膜直接接触曝光台，可搭配使用Xblot的曝光保护膜，隔绝膜与曝光台）

05 注意事项

06 存储条件

常温运输、储存,有效期2年。

*本品可能出现少量絮状物或轻微发黄,属正常现象,不影响产品性能。