01 试剂盒组成

02 所需材料(自备)

96 孔透明酶标板;酶标仪(562 nm);移液器及枪头;恒温水浴锅(60℃)。

03 实验前规划

在96孔板上,预先规划｢标准品区｣和｢待测样本区｣,标准品建议采用3重复,样品2重复。

04 工作液配置

根据上一步骤的实验规划:

工作液总体积= (标准品孔数+待测样本孔数+1)× 200 μL

试剂 A与B按照1:1混合,即得BCA工作液。(注意区别,其他品牌的一般为50:1)

05 加入BCA工作液

向｢标准品区｣和｢待测样本区｣孔中,依次加入 200 μL BCA 工作液。

06 加入标准品和待测样品

｢标准品区｣加入即用标准品 X溶液 0 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL,吹打混匀2-3次。｢在待测样品区｣加入待测样品10 μL, 依次吹打混匀2-3次(若样品珍贵,使用 X-RIPA UltraMix稀释以后进行测量)。

07 孵育

将加样完成的酶标孔板封盖后，置于水浴条件下孵育：60℃孵育 15 分钟，或 37℃孵育 30 分钟，以充分进行显色反应。

08 吸光值检测

孵育结束后(无需冷却),吸水纸吸去孔板板底水滴,使用酶标仪读取562 nm处吸光值(OD562)。

09 结果计算

以标准品的 OD562(无需扣除空白点)值为纵坐标、对应的标准品蛋白浓度(0、2.5、5、7.5、10)mg/mL为横坐标绘制标准曲线,计算待测样品的实际蛋白浓度。

10 注意事项

11 储存方式

常温储存。